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MEDICAL SERVICES

产品名称

细胞克隆形成实验

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  细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等的重要技术方法。实验方法包括平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。由于细胞生物学性状不同,细胞克隆形成率差别也很大,正常细胞克隆形成率弱,肿瘤细胞强;初代培养细胞克隆形成率弱,传代细胞系强;二倍体细胞克隆形成率弱,转化细胞系强。由于克隆形成率与接种密度有一定关系,做克隆形成率测定时,接种细胞一定要分散成单细胞悬液,随时检查,到细胞形成克隆时终止培养。

  当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。每个克隆含有50以上的细胞,大小在0.3-1.0 mm之间。集落形成率表示细胞的独立生存能力。各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测,细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

  技术流程

  A.平板克隆形成实验:适用于贴壁生长的细胞。

  1. 取对数生长期的各组细胞,制备细胞悬液。

  2. 将细胞悬液作梯度倍数稀释,分别接种含培养液的皿中,培养2-3周。

  3. 经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。

  4. 弃去上清液,4%多聚甲醛固定,GIMSA染色液染10-30 min。

  5. 计算克隆形成率,克隆形成率 =(克隆数/接种细胞数)× 100%。

  6. 结果统计分析。

  B.软琼脂克隆形成实验:适用于非附着依赖性生长的细胞。

  1. 制备细胞悬液,梯度倍数稀释。

  2. 分别制备1.2%和0.7%琼脂糖溶液。

  3. 下层琼脂凝固后放入37℃培养箱备用。

  4. 加入细胞悬液,待上层琼脂凝固后,培养10-14天。

  5. 计算克隆形成率,克隆形成率 =(克隆数/接种细胞数)× 100%。

  6. 结果统计分析。

  服务说明

  1. 客户提供:细胞株,所需药品,药物处理方式和浓度。

  2. 公司提供:原始数据及分析结果、完整的实验报告。

  3. 实验周期:20-40个工作日,具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定。

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