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线粒体膜电位检测

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  大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关,其中线粒体跨膜电位(MMP)的下降,被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃,则细胞凋亡不可逆转。

  JC-1是一种碳氰化合物类阳离子荧光染料,可作为检测线粒体跨膜电位指示剂。JC-1在细胞内以聚合体和单体两种不同的物理形式存在,分别处于不同的荧光发射峰。当JC-1 浓度低或膜电位水平低时,主要以单体形式存在,激发波长为527nm,呈绿色荧光;当JC-1浓度升高或线粒体膜电位水平较高时,形成聚合物,发出红色的荧光,激发波长为590nm。当细胞发生凋亡时,线粒体跨膜电位被去极化,JC-1从线粒体内释放,红光强度减弱,以单体的形式存在于胞质内发绿色荧光,根椐这一特征就可以检测线粒体膜电位的变化。

  技术流程

  1.细胞培养。

  2.用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性依照组合阳性对照组,收集细胞。

  3.用PBS洗涤细胞三次,收集不多于1×106的细胞。

  4.取100μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer,混匀并预热至37℃。

  5.吸取500μL 1×Incubation Buffer,加入1μL JC-1,涡旋混匀配成JC-1工作液。

  6.取500μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮,37℃,5% CO2的培养箱中孵育15~20min。

  7.室温离心(2000rpm, 5min)收集细胞,用1×Incubation Buffer洗两次。

  8.吸取500μL 10×Incubation Buffer重新悬浮细胞。

  9.流式细胞仪检测,分析。

  服务说明

  1.客户提供:细胞株、相关药品。

  2.公司提供:实验步骤、结果图、数据结果和分析报告。

  3.实验周期:10个工作日及以上视实验内容而定。

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