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酶活动力学检测

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  1.酶的量或浓度可以用摩尔量表示,或者用酶单位的活性表示。

  酶活力=每单位时间转化的底物摩尔数=速率×反应体积。酶活性是存在的活性酶量的量度,取决于指定的条件。SI单位是katal,1katal=1mol/s,更实际的和常用的值是酶单位(U)=1μmol/min。1 U对应16.67nanokatals。

  酶的比活力是另一种常见的单位,代表酶的纯度。用每毫克蛋白质所含的酶活力单位数来表示。比活力=活力U/mg蛋白。反应的速率是每单位时间的底物消失(或产物生成)的浓度。如果已知100%纯酶的比活性,那么不纯的样品将具有较低的比活性,从而可以计算纯度。

  2.为了检测一种酶的催化活性,有必要首先鉴定从底物(S)到产物(P) 转化所包含的化学变化。迄今为止,在各种关于酶催化活性文章的相关论述中,最典型的分类方式是按照其所催化的化学反应的类型来进行的(如氧化-还原、基团转移、消除、异构化、重排、缩合、竣化作用等)(FreyandHegeman,2007)。此外,还应该考虑是否存在机制相似的化学过程:①涉及小分子底物或大分子蛋白质或核酸;②在溶液中易于发生或需要膜结合组分才能进行;③逆反应进行到多大的程度。在任何情况下,酶的分析围绕着以可计量的方式将给定底物和相关产物的理化性质进行区分的能力来设计。在很大程度上,类似的活性检测方法已经应用于这些亚群中的各种酶。在以某种已有检测方法为基础来为下面两类酶首次设计检测方法时要慎重,即不同物种来源的同源酶或催化相关化学反应的不同的酶。酶活性检测的中心主题是确保初始速率的测定。为了重申这一要点,常见的和较好的做法是, 在具有小于等于 5% 产物转化的时间内测定反应物减少或产物生成的初始速率。这种做法可以给出在初始底物浓度条件下的最接近起始反应速率的值。

  常见的与酶测定有关的测定方法:

  1.荧光素二乙酸酯(FDA)水解测定。

  2.对硝基苯磷酸盐可介导 ELISA和常规分光光度测定。

  3.MTT测定。

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