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活性氧(ROS)检测

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产品描述

  活性氧检测(Reactive Oxygen Species Assay Kit)是一种基于荧光染料DCFH-DA(2,7-Dichlorodi -hydrofluorescein diacetate)的荧光强度变化,定量检测细胞内活性氧水平的最常用方法。

 

  DCFH-DA本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜。进入细胞内后,可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不会通透细胞膜,因此探针很容易被积聚在细胞内。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。在最大激发波长480 nm,最大发射波长525 nm处,使用荧光显微镜流式细胞仪激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。Rosup为活性氧阳性诱导药物,根据其荧光信号强度,可分析活性氧的真正水平。

 

注意事项

  1、抗体

  事先咨询我公司,明确抗体种属以及是否有该抗体可使用,如无可由双方协商而定,客户自己购买提供或我公司代购

  2、标本收集与保存

  组织样品:新鲜组织放入液氮或-70℃保存,组织不少于100mg(约绿豆大小)

  培养细胞:通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-70℃,避免反复冻融)

  血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-70℃可长期保存,避免反复冻融)

  血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(以上4℃可保存15-20天,-70℃可长期保存,避免反复冻融)

  3 、样本运输:可选以下任何的一种方式寄送标本

  组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后加冰袋运输

  细胞样本也可以直接快件寄送培养瓶(密封保证不污染,培养液不漏出,细胞不要长得太满,50%左右,灌满培养液)

  血清或上清液直接加冰袋寄送(密封保证液体不漏出,视路途远近2-3天可到达)

 

技术流程

  1、细胞培养

  2、用适当的方法诱导细胞凋亡,同时设立阴性对照组和阳性对照组,收集细胞

  3、用PBS洗涤细胞三次,收集不多于1×106的细胞

  4、取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×Incubation Buffer,混匀并预热至37℃

  5、吸取500 μL 1×Incubation Buffer,加入1μL JC-1,涡旋混匀配成JC-1工作液

  6、取500 μL JC-1工作液将细胞均匀悬浮,37℃,5% CO2的培养箱中孵育15~20min

  7、室温离心(2000rpm,5min)收集细胞,用1×Incubation Buffer洗两次

  8、吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新悬浮细胞

  9、流式细胞仪检测,分析

 

服务说明

  1、细胞株(冻存株或培养好的细胞),相关药品或MMP检测试剂盒(可代购)

  2、实验步骤、结果图、数据结果和分析报告

  3、实验周期:1-2周,具体需要根据细胞生长情况及实验内容而定

关键词:
吉卡生物
活性氧(ROS)检测
医学检测
医学检验
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