细胞划痕实验原理及步骤
- 分类：吉卡科普
- 作者：
- 来源：晟斯医学
- 发布时间：2021-07-16 13:22
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【概要描述】细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞...
细胞划痕实验原理及步骤
【概要描述】细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞...
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一、细胞划痕实验原理
细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域，称为“划痕”，划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合，在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，是研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。
二、细胞划痕实验步骤
1、细胞划痕实验所需材料：
6孔板(康宁，爱思进等国产或者进口品牌耗材均可)
marker笔
直尺
20微升枪头(灭菌)
无血清培养基
PBS
2、细胞划痕实验具体步骤如下：
(1)准备工作：所有能灭菌的器械都要灭菌，直尺和marker笔在操作前紫外照射30min(超净台内)
(2)先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。
(3)在空中加入约5X105个细胞，具体数量因细胞不同而不同，掌握为过夜能铺满。
(4)第二天用枪头比着直尺，尽量垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不要倾斜。
(5)用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入无血清培养基。
(6)放入37℃5%CO2培养箱培养。按0、6、12、24小时取样，拍照。
三、细胞划痕实验注意事项
1.划痕法测量适用的细胞范围较小，一般只适用于上皮细胞，纤维样细胞。
2.虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响，但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节，细胞迁移的速度也会慢很多。
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