在你的LEGEND MAX^TM ELISA试剂盒，有一个步骤，要求洗板子之前，增加样本。这一步的目的是什么?

 

　　我们通常使用预涂板的稳定器。额外的洗涤步骤是为了在你开始化验之前除去这些成分。如果不进行洗涤，对检测性能的影响是可以忽略不计的。

 

　　在你的ELISA试剂盒中使用了哪些抗体克隆?

 

　　在我们的试剂盒中使用的抗体克隆的信息是专有的。但是，抗体的克隆性(多克隆性或单克隆性)和宿主种类可根据要求提供。

　　我应该用血清或血浆样本进行ELISA实验吗?

 

　　这取决于你所分析的目标和你研究的细节。理想情况下，我们建议对感兴趣的目标测定血清和血浆的差异，并确定用于定量的样本类型。根据指标的不同，血清和血浆中的目标浓度可能存在差异。在制备血浆或血清样品时，最重要的因素是制剂的一致性，以确保精确的测量。一般来说，血浆/血清样品应不含微粒物质，不含过多的脂类，且无溶血现象。

 

　　这些类型的污染物会对背景造成影响，并对检测的准确性产生不利影响。关键是每次都要以同样的方式准备样品。即以同样的速度、同一时间离心样品，离心后立即除去血清或血浆，同时对样品进行摘录和冷冻。避免反复冻融循环。

 

　　我的样本中的分析物质含量可能很低。我可以用什么方法来改进检测?

 

　　对于我们的传奇MAX™和ELISA MAX™豪华格式，我们建议遵循提供的规程。如果与规程有偏差，我们无法保证套件的性能。如果您使用我们的ELISA MAX™标准格式，以下是一般建议：

 

　　· 通过增加洗涤次数和水洗之间的浸泡时间来控制背景噪声。

 

　　· 控制分析精度。例如，在你的管道中要更加小心和一致，使用新鲜的纸巾来敲打盘子，以避免粘附素-HRP的污染，并增加洗涤量。

 

　　· 增加孵化时间。请注意，这通常也会增加背景，因此检测灵敏度可能不一定会增加。

 

　　· 如果可能的话，集中你的样本。

 

　　· 采用五参数Logistic曲线拟合方法，更准确地计算标准曲线下端样品浓度。

 

　　在许多情况下，样品可能只是含有很低到无法检测到的分析物水平。无论你如何操纵检测，你可能仍然无法获得可检测的浓度。

 

　　我们的ELISA试剂盒中没有捕获/检测抗体。我们能用一种单独的/单一的抗体来代替它吗?

 

　　不，我们不建议使用独立试剂来替换组件，如果您替换或组合了来自不同工具包/制造商的试剂，则不能保证该组件的性能。

 

　　我能用你的工具箱运行几个样本?

 

　　这将取决于你的样品是一式两份还是一式三份。例如，在添加标准之后，您可以运行80个没有副本的样本，或者一次运行40个样本等等。

 

　　镀膜后应如何存放?

 

　　如果涂布板不能立即使用，则应密封，并在4°C存放一夜。

 

　　我有多个MAX™ELISA试剂盒，我想同时运行。我可以为所有的工具包使用相同的洗涤缓冲液吗?

 

　　在我们所有的传说提供的最大™套件中提供的洗涤缓冲器是相同的，并且在这些套件中的洗涤缓冲瓶上的部件编号应该是相同的。对于ELISA MAX™Deluxe和ELISA MAX™标准集，我们在每个工具包的技术数据表上提供了洗涤缓冲液的配方。这个配方是相同的所有ELISA最大的™集。

 

　　我正在使用生物素和纯化格式的同一抗体克隆，试图建立我自己的ELISA，但我没有成功。

 

　　如果您使用相同的克隆同时检测和捕获抗体，表位可能已经被其中一个抗体占据，并阻止了另一个抗体的结合。我们建议为捕获和检测抗体选择不同的克隆。

 

　　我在哪里可以找到对ELISA检测的疑难解答提示?

 

　　请咨询我们的ELISA故障排除指南.

 

　　我什么时候应该使用图例MAX™ELISA试剂盒与预涂层板?

 

　　图例MAX™试剂盒是现成的，为方便使用而设计，并尽量减少对ELISA镀膜和准备缓冲稀释剂的要求.我们向新加入ELISAs的用户推荐图例MAX™工具包。

 

　　我的ELISA应该用哪种涂层缓冲液?

 

　　一般来说，我们建议使用PBS(pH7.4)或碳酸盐缓冲液(pH9.5)。您所选择的确切的涂层缓冲液可能取决于所检测到的细胞因子。

 

　　为什么我们建议不要在ELISA缓冲液中使用叠氮化物?

 

　　叠氮是一种不可逆的HRP抑制剂。

 

　　你的ELISA试剂盒的灵敏度是多少?

 

　　如果您使用的是图例MAX™或ELISA MAX™Deluxe格式，请参阅个别工具包的手册，以获得更多关于灵敏度的信息。我们不提供这一信息的ELISA最大™标准集，但在理论上，它应该匹配的ELISA最大™豪华格式，如果你使用所有的生物LEGEND试剂。

 

　　生物LEGEND ELISA产品的保质期是多少?

 

　　生物LEGEND MAX™ 工具包是保证3个月从收到之日起。ELISA MAX™集保证12个月后，收到日期。对于大量特定的保质期日期，请参阅每个产品上的盒子标签.

 

　　我能用这个试剂盒提供的重组标准进行生物测试吗?

 

　　不，我们不建议在任何其他应用中使用重组蛋白标准。试剂盒中包含的蛋白质标准已经校准，作为ELISA标准使用，并且没有进行生物活性测试。此外，ELISA蛋白标准可能含有其他载体蛋白，而且没有进行与我们相同的不育检测。生物活性重组蛋白.

 

　　我能用组织培养级无菌板进行ELISA吗?

 

　　没有。组织培养板是为细胞培养而设计的，通常不具有较高的蛋白质结合能力。对于ELISAs，我们建议使用高蛋白结合板，如nunc Maxisorp™板(Cat. No. 423501).

 

　　我能否使用作为ELISA试剂盒的一部分提供的捕获和检测抗体，用于其他应用，如流式细胞术染色?

 

　　在我们的LEGEND ELISA试剂盒中使用的抗体已经在ELISA检测中得到验证，我们不能保证它们将在其他应用中起作用，比如流式细胞术。相反，我们建议您在这些实验中使用流式细胞术验证的抗体。

 

　　我能用你的ELISA试剂盒做我的组织样本吗?

 

　　一般来说，BioLegend的ELISA产品可以用于组织或细胞提取物/匀浆，只要样品的制备方式与免疫反应相一致。为此，我们建议使用以下准则：

 

　　· 组织/细胞应在不含变性化学物质(如尿素、硫脲、SDS)的中性pH缓冲液中溶解或匀浆。

 

　　· 没有或最低水平的洗涤剂(如SDS，Triton™X-100).

 

　　· 没有过高的离子强度(盐浓度大于生理离子强度)。

 

　　· 缓冲液应含有足够的蛋白酶抑制剂混合物，以防止目标蛋白被细胞释放的酶降解。

 

　　像血清这样的样品可以重复使用吗?

 

　　我们不建议重复使用样本。为了得到准确的结果，样品应该被引用并储存起来，只供一次使用.如果您决定重用一个样本，您将需要执行额外的验证实验，以确保您能够获得准确的读数。这将受到许多因素的影响，包括样品的稳定性。

 

　　我能用你的配对ELISA抗体和另一家公司的蛋白质标准吗?

 

　　如果抗体是作为试剂盒的一部分提供的，我们不建议联合来自不同ELISA试剂盒的试剂。如果您将来自多个工具包或制造商的试剂组合在一起，我们无法保证该工具包的性能。如果你购买了个人抗体，并正在开发自己的ELISA，这可能是可能的，但需要进行测试。如果用于产生抗体的免疫原在序列或结构上与蛋白质标准不同，则抗体可能无法识别或显示与蛋白质标准的结合不良。

 

　　在哪一步我可以推迟我的ELISA程序几天?我可以冷冻我的盘子以备以后用吗?

 

　　最好遵循建议的协议，不要再拖延。然而，如果你想暂停实验，我们建议在阻断步骤(在涂上捕获抗体之后)推迟这个过程。在井中加入2 0 0μL的封堵缓冲液，隔夜将平板置于4°C(信号最小或无信号损失)，或在-2 0°C下冻结几天(对信号可能有一定影响)。在第一步延迟程序(包被捕获抗体超过16-20小时。在4°C)是不可取的，因为它可能导致高背景。

 

　　我用完了一些ELISA试剂盒，我能单独购买吗?

 

　　也许可以单独购买一些组件。请联系我们的技术服务小组并提供大量信息的试剂盒及其组件，以确定这是否可行。

 

　　我可以混合来自不同的ELISA最大的™集的试剂或用于其他应用?

 

　　这是不建议的。ELISA最大™试剂是针对某一特定批次进行优化的，除了ELISA之外，它们还没有经过其他应用的质量测试。

 

　　用捕获抗体包被的时间能比一夜长吗?

 

　　一般建议在4°C下涂敷16-20小时.更长的孵育时间可能会增加结合在平板上的捕获抗体的数量，这可能会增加背景噪声。

 

　　我可否在标准曲线的较高端加一个额外的标准，以计算更高浓度的分析物?

 

　　我们不推荐这种做法。工具包的灵敏度取决于单个组件及其作为工具包的集体验证，它不会通过在标准曲线上添加额外的点数而改变。

 

　　我是否可以在标准曲线的低端增加一个额外的标准，以提高我的检测的灵敏度?

 

　　这也许是可能的，但你可能最终会在更高浓度的标准下形成信号平台。一般建议使用用户手册中推荐的浓度范围。

 

　　培养基中的酚红是否干扰ELISA检测?

 

　　不，细胞培养液中的酚红不会干扰ELISA法的读数。

 

　　对于你的一些ELISA试剂盒，为什么我的血清样本需要稀释分析缓冲液?

 

　　在某些情况下，需要用分析缓冲液稀释，以尽量减少样品与标准之间的矩阵差异，以获得更高的准确度。

 

　　我怎样才能获得更好的信号和灵敏度为我的ELISA检测?

 

　　增加孵育时间(样本、检测抗体或亲和素-HRP或TMB底物)。请注意，这也可能增加背景在您的分析，并可能不会增加敏感性。

 

　　孵化过程中的摇动板。

 

　　确保在使用前完全重新制定标准。

 

　　·增加洗涤和洗涤之间的浸泡，以进一步减少背景。

 

　　·如果可能的话，在450到570(或最近)nm处阅读版面，以进行背景减法。

 

　　·通过控制移液误差或用更大体积的洗涤缓冲液洗涤来提高重复CV%。

 

　　·采用5-PL或4-PL曲线拟合方法，而不是线性拟合。这通常用曲线拟合软件进行，并在曲线的低端提供更好的计算。

 

　　你的ELISA Kits和 Sets有什么区别?

 

　　这些试剂盒之间的主要区别是包括在试剂盒或集合中的试剂。

　　LEGEND MAX™：充分验证和准备使用的工具包.它们包含所有所需的试剂，包括预涂有捕获抗体的96孔条板。

 

　　ELISA MAX™：将检测时间缩短到不到90分钟。每个试剂盒都经过了充分的验证，并包含了一个96孔的条状板，它已经被预先包覆以固定捕获抗体。

 

　　ELISA MAX™豪华：一个更具成本效益的选择，包括大多数缓冲，预滴定抗体，重组标准和底物。板子不包括在这个套件中，必须单独购买。

 

　　ELISA MAX™标准：提供完成ELISA的基本成分，包括重组蛋白标准、捕获和检测抗体以及亲和素-HRP。这个集合需要一些优化，对于那些想通过提供自己的缓冲液和板子来扩展他们的预算的人来说是完美的。

 

　　ELISA MAX™豪华套装是带板子的吗?

 

　　不，ELISA MAX™豪华套装不带板子。涂层缓冲液和分析稀释剂(用于堵塞和稀释)包括在这些套装里。板子可以单独订购(Cat No. 423501)，有关涂布板的说明载于成套产品手册中。

 

　　我能用不同公司的不同成分来做我的ELISA吗?

 

　　不同的制造商在试剂盒中经常使用不同的抗体克隆。抗体的特异性部分决定了检测到了多少信号。

 

　　此外，不同的试剂盒可以使用用不同方法表达和纯化的重组蛋白标准。例如，在大肠杆菌中表达的重组蛋白主要由于复性不一致而表现出不同的免疫反应性。套件标准是根据不同制造商之间的不同参考进行生产和校准的，因此很难比较来自不同套件的组件。每个BioLegend ELISA试剂盒都是根据试剂浓度和为分析稳健性优化的方案开发和验证的。试剂(标准、抗体、匹配矩阵)和方案的任何改变都会影响最终的分析性能。

 

　　为什么我的样本的细胞因子浓度与其他ELISA试剂盒不同?

 

　　在比较不同供应商的不同细胞因子试剂盒时，很难获得完全相同的PG/ml浓度的样品，部分原因是供应商可能使用对目标蛋白有不同免疫反应的不同试剂(包括抗体克隆)。细胞因子的浓度在试剂盒之间可能会有几倍的变化，这并不罕见。

 

　　一般来说，尤其是在PG/mL范围内的细胞因子，更重要的是要有匹配的生物学趋势，而不是完全匹配浓度。这就是说，由不同供应商的不同试剂盒测量的相同的细胞因子在相关治疗中应该表现出相同的生物变化模式。

 

　　某一特定分析物在生物样品中的预期浓度(例如，NA、VE、动物或正常人的血清样本中的浓度)是多少?

 

　　由于每个样品都是独特的，因此很难预测，因为这可能取决于样品的制备和分析物的性质。

 

 

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