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慢病毒包装
- 分类：无分类内容
- 发布时间：2019-10-16 00:00:00
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慢病毒包装
慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA，其基因组进入细胞后，在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA，形成DNA整合前复合体，进入细胞核后，DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA，回到细胞浆中，表达目的蛋白或产生RNAi干扰。
慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定，原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂。另外，慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比，比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体，有鲜明的特色。大量文献研究表明，慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。
慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白，免疫原性低，在注射部位无细胞免疫反应，体液免疫反应也较低，不影响病毒载体的第2次注射。
慢病毒包装的特点
1.能将外源基因有效整合入宿主染色体，外源基因表达水平较高、表达稳定;
2.广泛的宿主，可感染分裂和不分裂的细胞，几乎可以感染所有类型的细胞，特别适合质粒载体转染效率低的细胞;
3.适用范围广，可用于体外细胞系和活体动物模型，研究基因和RNAi等;
4.转导效率高，不需要转染试剂，目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加。
注意事项
1.细胞生长状态对于病毒包装至关重要，因此需要保证良好的细胞生长状态和较少的细胞传代次数，细胞代数不要超过20代。
2.在质粒转染时细胞培养基里面不要添加抗生素(如P/S、G418等)。
3.病毒切勿反复冻融，冻融次数尽量不要超过3次，每冻融一次大约有10%左右的病毒损失，应按每次使用的病毒量来分装然后冻存于-80℃冻箱，保存时间尽量不要超过6个月。
服务说明
1.客户提供目的基因的序列，如果提供模板，请告知载体、酶切位点等信息;
2.若实验材料为原代细胞或者特殊培养的细胞，请先咨询;
3.公司默认提供病毒滴度为1×107-1×108TU/ml,规格1ml;
4.目的蛋白的功能验证另外收费。
提交的产品和资料
1.实验报告;
2.构建好的病毒重组质粒;
3.提供至少1ml滴度>1×107-1×108TU/m的病毒。
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