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慢病毒包装

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  慢病毒包装

  慢病毒载体(Lentiviral vector, LVs)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统,它能高效的将目的基因(或RNAi)导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体基因组是正链RNA,其基因组进入细胞后,在细胞浆中被其自身携带的反转录酶反转为DNA,形成DNA整合前复合体,进入细胞核后,DNA整合到细胞基因组中。整合后的DNA转录mRNA,回到细胞浆中,表达目的蛋白或产生RNAi干扰。

  慢病毒载体介导的基因表达或RNAi干扰作用持续且稳定,原因是目的基因整合到宿主细胞基因组中,并随细胞基因组的分裂而分裂。另外,慢病毒载体能有效感染并整合到非分裂细胞中。以上特性使慢病毒载体与其它病毒载体相比,比如不整合的腺病毒载体、整合率低的腺相关病毒载体、只整合分裂细胞的传统逆转录病毒载体,有鲜明的特色。大量文献研究表明,慢病毒载体介导的目的基因长期表达的组织或细胞包括脑、肝脏、肌肉、视网膜、造血干细胞、骨髓间充质干细胞、巨噬细胞等。

  慢病毒载体不表达任何HIV-1蛋白,免疫原性低,在注射部位无细胞免疫反应,体液免疫反应也较低,不影响病毒载体的第2次注射。

  慢病毒包装的特点

  1.能将外源基因有效整合入宿主染色体,外源基因表达水平较高、表达稳定;

  2.广泛的宿主,可感染分裂和不分裂的细胞,几乎可以感染所有类型的细胞,特别适合质粒载体转染效率低的细胞;

  3.适用范围广,可用于体外细胞系和活体动物模型,研究基因和RNAi等;

  4.转导效率高,不需要转染试剂,目的基因整合到宿主细胞基因组的概率大大增加。

  注意事项

  1.细胞生长状态对于病毒包装至关重要,因此需要保证良好的细胞生长状态和较少的细胞传代次数,细胞代数不要超过20代。

  2.在质粒转染时细胞培养基里面不要添加抗生素(如P/S、G418等)。

  3.病毒切勿反复冻融,冻融次数尽量不要超过3次,每冻融一次大约有10%左右的病毒损失,应按每次使用的病毒量来分装然后冻存于-80℃冻箱,保存时间尽量不要超过6个月。

  服务说明

  1.客户提供目的基因的序列,如果提供模板,请告知载体、酶切位点等信息;

  2.若实验材料为原代细胞或者特殊培养的细胞,请先咨询;

  3.公司默认提供病毒滴度为1×107-1×108TU/ml,规格1ml;

  4.目的蛋白的功能验证另外收费。

  提交的产品和资料

  1.实验报告;

  2.构建好的病毒重组质粒;

  3.提供至少1ml滴度>1×107-1×108TU/m的病毒。

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